R återhämtning

1. Ta bort det frusna röret från flytande kväve och omedelbart till ett 37℃ vattenbad, skaka lätt. Efter att vätskan smält (ca 1-1,5 minuter), ta ut lite alkohol och lägg den på det ultrarena arbetsbordet.

2. Ta upp cellsuspensionen i ett 15 ml centrifugrör med 10 ml medium (tvätta det frusna röret med mediet och tvätta alla celler som fastnat på väggen) och centrifugera vid 1000°C i 5 minuter.

3. Supernatanten vändes om och 1 ml av mediet tillsattes för att suspendera cellerna. Rök i en 10 cm skål med 10 ml medium och skaka försiktigt åt vänster och höger för att fördela cellerna jämnt i skålen.

4. Markera celltyp och datum, människonamnet och så vidare, lägg det i CO2-inkubatorn, stick fast cellerna och byt medium.

5. Medium byttes en gång var tredje dag.

P assage

1. Växter passerades för att nå 80-90% täckning.

2. Abup originalmediet .

3. Tillsätt lämplig trypsin (bara täck cellerna) och smält i 1-2 minuter .

4. Digestionen avslutades genom att tillsätta en lika stor volym av det seruminnehållande mediet .

5. Blås cellerna med en pipettpistol och låt dem alla sväva.

6. Celler aspirerades in i ett 15 ml centrifugrör och centrifugerades vid 1000°C under 5 min.

7. Häll supernatanten och tillsätt 1-2 ml medium för att blåsa upp alla celler.

8. Celler överfördes till flera odlingsskålar beroende på cellarten. I allmänhet delas cancerceller in i 5 celler och tre normala celler överförs. Fortsätt att odla.

Fri att smälta cellerna och centrifugera dem (ibid. ovan).

Suspendera cellerna med den matchade frysta lagringslösningen, dela upp dem i ett steriliserat frysrör, vila i några minuter och ange celltyp och fryst lagringsdatum. lagras sedan i flytande kväve perfusion.

Beredning av kryokonserveringslösning: 70 % medium 20 % FBS 10 % DMSO. DMSO bör tillsättas långsamt och skakas stadigt.