Som ett hjälpmaterial i ELISA-detektionsexperiment, ett enzym tallrik spelar en avgörande roll och påverkar direkt de slutliga försöksresultaten. Kvaliteten på Enzymplatta beror främst på dess känslighet för proteinadsorption, skillnaden i proteinadsorptionskapacitet mellan plattor och hål, och skillnaden mellan partier av det köpta enzymplatta . Därför väljer du en enzymplatta produkt med hög proteinadsorptionskänslighet, den lilla skillnaden mellan hålen med proteinadsorptionskapacitet och en liten skillnad mellan batcherna är garantin för försöksledaren att få tillförlitliga och stabila experimentella resultat.

Enzymplatta klassificering: enligt olika klassificeringsstandarder, plattan har olika klassificeringar.

1: Beroende på antalet hål kan den delas upp i 96 hål, 48 hål etc. Eftersom enzymplatta används huvudsakligen med mikroplattläsaren, den tallrik meter på marknaden är som mest 96 hål, så mikroplattan är 96 hål.

2: Enligt de olika bottnarna är den uppdelad i platt botten, U-botten, V-botten osv.

Den platta basens brytningsindex är lågt, vilket är lämpligt för detektering i mikroplattan;

T U-mikroplattans brytningsindex är högt, bekvämt för provtagning, provtagning och blandning, och kan direkt observera färgförändringen utan att placera den på mikroplattan, för att avgöra om det finns en motsvarande immunreaktion.

Mikroplattan på V-basen kan absorbera provet exakt.

3: Enligt de olika bindningsförmågan hos mikroplattan och proteinet och andra molekyler är den uppdelad i hög bindningskraft, medium bindningskraft och aminering.

(1) Hög bindningskraft

Efter ytan av denna mikroplatta förbättras dess proteinbindningsförmåga avsevärt, upp till 300~400 ng IgG / cm2, och molekylvikten för det huvudsakliga bundna proteinet är> 10 kD. Användningen av denna klass av mikroplattor kan förbättra känsligheten och kan minska koncentrationen och mängden belagt protein relativt, vilket är lättare att producera ospecifika reaktioner. Efter beläggning med antigen eller antikropp kan den icke-joniska detergenten inte effektivt täta platsen för det obundna proteinet, och proteinet bör användas som tätningsmedel.

(2) Medium bindningskraft

Sådana mikroplattor binder passivt till proteinet genom hydrofoba bindningar på ytan och är lämpliga som fastfasbärare för makromolekylära proteiner med molekylvikt > 20 kD, med en proteinbindningskapacitet på 200 till 300 ng IgG/cm2. På grund av egenskaperna hos dess enda bindning till makromolekyler är den lämplig för fastfasbärare som orenade antikroppar eller antigener för att minska risken för ospecifik korsreaktivitet. Plattan kan vara ett inert protein eller en nonjonisk detergent som en tätningslösning.

(3) Aminering

Denna mikroplatta har efter en ytmodifiering en positivt laddad aminogrupp, vars hydrofoba bindning är ersatt av en hydrofil bindning. Denna klass av mikroplattor är lämplig som en fastfasbärare för småmolekylära proteiner. Med hjälp av en lämplig buffert och pH binder ytan till negativt laddade små molekyler via jonbindningar. På grund av de hydrofila egenskaperna hos dess yta och dess förmåga att bindas kovalent av andra tvärbindare, kan den användas för att fixera proteinmolekyler lösliga i dekontamineringsmedel som Triton-100, Tween 20, etc. Defekten på denna platta är på grund av minskad hydrofobicitet; dessutom måste ytan vara effektivt stängd. På grund av de hydrofila och kovalenta ytegenskaperna måste den använda tätningslösningen kunna interagera med vilken funktionell grupp som helst i den icke-reaktiva aminogruppen och den valda tvärbindaren.

4. Beroende på färgen kan de delas in i transparent, svart och vit.

Transparent är den vanligaste användningen för de mest allmänna enzymkopplade immuniseringsexperimenten. I Relcontrast till den genomskinliga mikroplattan finns det också ogenomskinliga mikroplattor för ljusdetektion, vanligtvis svartvita. Den svarta mikroplattan själv har ljusabsorption, så dess signal är mycket lägre än den vita mikroplattan, så den används vanligtvis för att detektera starkt ljus, såsom fluorescensdetektion. Den vita mikroplattan används för svag ljusdetektion, ofta för allmän kemiluminescens. Dessutom kan den svarta mikroplattan också försvaga problemet med ospecifika reaktioner. Samtidigt är det viktigt att notera att med den allmänna mikroplattan inte kan ljusdetektion, eftersom ljuset som emitteras från kemiluminescensreaktionen är isotropiskt, om ljuset inte bara sprids från den vertikala riktningen med en transparent mikroplatta, men också från den horisontella riktningen, gör ljus lätt genom gapet mellan hålet och hålväggen, vilket resulterar i att ljuset av ljusabsorptionsvärdet för hålet påverkas av det intilliggande hålets emitterade ljus.

En bra mikroplatta bör ha bra adsorptionsprestanda, lågt blankvärde, hög transparens för hålets botten och liknande prestanda mellan plattorna och mellan hålen på samma platta. På grund av skillnaden i råmaterial och skillnaden i produktionsprocessen är kvaliteten på olika produkter mycket olika, därför måste prestandan för varje sats av mikroplatta kontrolleras i förväg före användning. De vanligaste inspektionsmetoderna är en viss koncentration av humant IgG (vanligtvis 10 ng/ml) belagt med ELISA-plattbrunnar, efter tvättning, tillsats av en lämplig utspädning av enzymmärkt anti-human IgG-antikropp till varje brunn, tvättning efter värmekonservering, lägga till substratfärg, stoppa enzymreaktionen och mäta absorbansen av lösningen i respektive brunn. Reaktionsbetingelserna kontrollerades så att avläsningen av varje brunn hölls vid en absorbans av omkring 0,8. Genomsnittet av de totala avläsningarna beräknades. Skillnaden mellan medelvärdet av alla individuella avläsningar och alla avläsningar ska vara mindre än 10 %. Följande tre mikroplattor är A, B och C som exempel.

Direkt metod: för att detektera adsorptionen av humant IgG på ytan av mikroplattan

Dubbel antikroppssandwichmetod: antigen i serum positivt för anti-human antikropp

Som kan ses från ovanstående figur, i dessa tre typer av bioenzymplattor, har klass A-mikroplatta en bättre proteinadsorptionseffekt, men förbättrar också känsligheten för proteinadsorption, vilket kan ge mer tillförlitliga experimentella data. Dessutom kan du fråga om plattan för batchskillnaden. Följande är batchskillnaden för en viss platta. Som framgår av datadiagrammet för skillnader inom satsen har mikroplattan god stabilitet mellan satser och variationskoefficienten inom satsen (CV) är cirka 5,0 %, vilket är betydligt lägre än variationskoefficienten inom satsen under 10,0 % i kvalitetskontrollstandarden för klinisk immunreaktion. Därför är den också lämplig för ELISA-experiment.