Innan experimentet ska alla reagenser och prover balanseras till rumstemperatur; efter omsmältning ska proverna centrifugeras igen och supernatanten tas för testning; för reagens eller provberedning, blanda och undvik skumbildning; kalibrering och prover rekommenderas för duplikattestning.

1. Lägg till ple: tillsätt standardarbetslösningen i de första två brunnarna i tur och ordning och tillsätt två hål för varje koncentration av arbetslösning, 100 μ L av varje brunn. Prover som ska testas läggs till andra brunnar, 100 μ L per brunn (för provkoncentrationer över testintervallet, provet utspätt med standard- och provspädningar). Mikroplattan filmbelagdes och inkuberades vid 37°C ℃ i 90 min. Tips: När du lägger till provet i botten av mikroplattan, försök att inte röra vid hålväggen, skaka försiktigt och blanda för att undvika att det bildas bubblor. Tilläggstiden bör kontrolleras inom 10 minuter.

2. Biotinylerad antikropp/antigen: kassera vätskan och skaka torr utan tvättning. 100 μL biotinylerad antikropp/antigen arbetslösning tillsattes omedelbart till varje brunn, blandades, mikroplatta plus filmbelagd och inkuberades vid 37 ℃ i 1 timme.

3. Tvättning: skaka vätskan i hålet, tillsätt 350 μL tvättvätska i varje brunn, blötlägg i 1-2 minuter, sug av eller skaka av vätskan i mikroplattan och klappa torrt på det tjocka absorberande pappret. Upprepa detta tvättplattasteg 3 gånger. Tips: Tvättmaskinen kan användas här och i andra tvättmoment. Varje steg av tvätt är avgörande för experimentet.

4. HRP-enzymkonjugat: 100 μ L enzymkonjugat arbetslösning per brunn, blandad, belagd med film och inkuberad vid 37 ℃ i 30 minuter.

5. Tvättning: kasta vätskan i brunnen och tvätta plattan 5 gånger på samma sätt som steg 3.

6. Substrat: tillsätt 90 μL substratlösning (TMB) till varje brunn, blanda väl, tillsätt filmbeläggning och inkubera vid 37 ℃ i cirka 15 minuter. Obs: Inkubationstiden bör förkortas eller förlängas beroende på den faktiska färgutvecklingssituationen, men inte över 30 minuter. Den kan avslutas när en tydlig lutning uppträder i standardhålet.

7. Uppsägning: Lägg till 50 μ L termineringslösning till varje brunn för att avsluta reaktionen. Notera: tillsatsordningen för termineringslösningen bör vara densamma som för substratlösningen.

8. Läs: Mät omedelbart den optiska densiteten (OD) för varje brunn vid 450 nm med en mikroplattläsare. Mikroplattläsaren bör öppnas i förväg för att ställa in testproceduren.

9. Efter experimentet, sätt tillbaka det oanvända reagenset i kylen enligt den angivna lagringstemperaturen tills hållbarhetstid.